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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | M3009.0250 |
|---|---|---|---|
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 化工,生物產業,制藥/生物制藥 |
Genaxxon：SNP Pol DNA Polymerase
出色的 SNP 檢測，可可靠區分不同的等位基因
性能優異，特別適用于等位基因特異性 PCR （as-PCR），也是高選擇性 PCR 的選擇
使用標準引物保證簡單的引物設計，您只需改變 3' 核苷酸
保證高靈敏度：在 >10 000 個野生型拷貝中可檢測到少于 10 個突變拷貝
由于基于適配體的熱啟動功能，沒有假擴增。
SNP Pol DNA 聚合酶可有效區分 3' 端錯配的引物。只有當引物 100% 適合 3'-端時，聚合酶才會擴增。如果引物在 3' 端直接有一個堿基交換（點突變），則不會進行擴增。這種設計的聚合酶也可用作 SNP PolTaq 變體，其具有 5'-3'-核酸酶活性，因此可用作探針 qPCR 中的分子信標或 TaqMan® 探針，用于基于水解探針的檢測。
SNP Pol DNA 聚合酶用于簡單、可靠和快速的等位基因特異性區分，例如。CRISPR / Cas9 點突變，用于檢測不正確的 CRISPR / Cas9 產物，或驗證測序結果。SNP Pol DNA 聚合酶可區分高度特異性，無論是否存在引物-模板-復合物的不匹配。錯配（點突變）必須在引物的 3 ' 端。因此，突變等位基因可以與野生型等位基因精確區分 - 無需測序，因為聚合酶在錯配的情況下根本不擴增。
只需將引物放在假定的點突變上（重要提示：點突變必須在 3 '端），聚合酶就會以幾乎 100% 的準確率檢測到該區域的錯配：如果與引物的 3' 端互補的模板堿基顯示突變，而引物沒有，則不會發生擴增 - 在短時間內 100% 確定！
因此，SNP Pol DNA 聚合酶可以輕松、省時且經濟高效地用于篩選點突變。
變體 SNP PolTaq DNA 聚合酶 > 具有 5'-3'核酸酶活性，因此可用于特異性水解探針，如 Taqman® 探針或分子信標。
描述
SNP Pol DNA 聚合酶是一種高選擇性 DNA 聚合酶，用于檢測 S單核苷酸 P卵形性。它是專門為等位基因特異性鑒別而開發的，其中需要非常高的鑒別率，例如，在等位基因特異性 PCR （ASA;AS-PCR）、等位基因特異性引物延伸 （AS-PEX）、SNP 分析、基因分型或甲基化特異性 PCR （MSP）。許多其他 DNA 聚合酶可耐受錯配的引物-模板復合物，因此不適合。另一方面，SNP Pol DNA 聚合酶可以特異性地區分這些（高鑒別性），并且只提供具有匹配引物對的 PCR 產物！Genaxxon SNP Pol 和 SNP PolTaq DNA 聚合酶通過兩個等位基因之間的等位基因特異性 PCR 相差高達 100%，并且在簡單的 qPCR 之后，給出了存在哪個等位基因的明確結果。因此，CRISPR/Cas9 技術的巨大潛力可用于人類醫學和植物生物技術，尤其是與 SNP PolTaq 或 SNP Pol DNA 聚合酶一起使用。
等位基因特異性 PCR 可用于量化野生型序列池或背景中的突變率。NGS 確定的突變頻率的驗證也可以通過等位基因特異性 PCR 和 SNP Pol DNA 聚合酶進行驗證。SNP PolTaq DNA 聚合酶非常適合液體活檢樣品的分析。使用 SNP PolTaq，可以很好地分析和量化癌癥突變的存在和頻率。
下圖：應用資料 SNP Pol DNA 聚合酶
我們建議使用較短的擴增子長度（約 60-200 bp）以獲得最佳結果，但也建議使用較長的擴增子長度。如果擴增子較長 >500 bp），則可能需要添加額外的鎂 （+0.5 - 1.5 mM）。
故障排除：
PCR 30 個循環后沒有條帶！
缺失或弱條帶的優化程序。
退火溫度過低！
注意力： SNP Pol 是一種適配體抑制的 DNA 聚合酶。使用的適配體寡核苷酸在 <55°C 的溫度下可逆地抑制聚合酶！因此，引物的理想退火溫度應為 >57°C。
- real-time PCR 方法
- 檢查 dNTP 濃度。這應該在 200 到 300 μM 之間（在 PCR 中）。
- 增加循環次數（至少 35 次，最好等于 40 次）
測試優化 - 循環
次數 在終點檢測中，30 個循環計數并不總是足以生成清晰可見的波段。例如，以少于 200 個 DNA 拷貝為起始值。因此，應使用實時 PCR 進行檢測，或者應使用五個平行 PCR，其中一個在五個不同循環后從 PCR 設備中取出（示例如下）。
終點檢測：
使用 SNP Pol DNA 聚合酶平行構建 5 個相同的 PCR 反應。 在 20、25、30、35 和 40 個循環中分別從循環儀中取出一個 PCR 管，并在最后將所有五個反應應用于瓊脂糖凝膠。 這使得很容易識別 PCR 中給定應用（起始材料、靶標、引物）的最佳循環數。
含細胞裂解物
的 SNP Pol PCR 動物細胞和大腸桿菌可直接用于 SNP Pol DNA 聚合酶的 PCR！無需單獨裂解或蛋白酶 K 消化。
PCR 程序：
1. 每個 PCR 批次需要 50 - 500 個細胞！
2. 制備帶有引物和緩沖液的 PCR 混合物，并置于冰上！
3. 將挑選的菌落直接加入 10-20 μL 水中（無需單獨裂解，無需蛋白酶 K 消化）， 短暫渦旋（5 秒），然后將該細胞懸液直接添加到 PCR 反應混合物中，例如 10 μL 細胞懸液，用于 PCR 制備，總體積為 20 μL。2-3 分鐘的初始變性時間就足夠了 足夠，必要時可延長至 5 分鐘。
每個反應最多 100 個拷貝的基因組 DNA 相對較低，但應該仍然有效。 該細胞懸液的其余部分也可以冷凍掉，以便進行進一步的測試。
可選：
4。如果可能：進行實時熒光定量 PCR！
SNP Pol DNA 聚合酶（M3009 > 或 M3061 >）可與非特異性熒光染料（例如 Genaxxon 的 Green DNA 染料 > 或 SybrGreen®）一起用于實時 PCR。當使用特異性 PCR 探針時，只能使用 SNP PolTaq DNA 聚合酶，因為只有這些探針具有 5'-3'核酸外切酶活性。
使用我們的高質量 dNTP（> Set （M3015.4100） 或混合 （M3016.1010） > 或我們的 DNALadders > 和我們有利的標準瓊脂糖 （M3044） >我們可以為您的 PCR 提供額外的產品。
SNP Pol DNA 和 SNP Pol DNA 聚合酶
的應用領域 - 點突變的監測、驗證和檢測
- 鑒定正確或錯誤的 CRISPR/Cas9 產品
- 測序結果
的驗證/確認 - 突變的定量（例如 NGS 結果）
- 通過等位基因特異性擴增 （ASA） / 等位基因特異性 PCR
進行 SNP 檢測- 亞硫酸氫鹽處理 DNA 后的甲基化特異性 PCR （MSP）（CpG 甲基化側）
- HLA 基因分型
- 微測序
- 使用水解探針進行實時 PCR
- 實時多重 PCR
- DamID-seq data in C. elegans.
As an alternative to ChIP, DNA adenine methyltransferase identification by sequencing (DamID-seq) was recently shown to be able to characterize binding sites in single mammalian cells. Additionally, DamID can be achieved for cell-type specific analysis by expressing Dam fusion proteins under tissue specific promoters in a controlled manner. In this report, we present a user-friendly pipeline to analyse DamID-seq data in C. elegans.
Sharma R, Ritler D, Meister P.
Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925.
- Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in:
Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syv?nen AC.
Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129.
- Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase
Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640
- 監測、驗證和檢測點突變 - 識別正確或錯誤的 CRISPR/Cas9 產品 - 測序結果的驗證/確認 - 突變定量（例如 NGS 結果） - 通過等位基因特異性擴增 （ASA） / 等位基因特異性 PCR 進行 SNP 檢測 - 亞硫酸氫鹽處理 DNA 后的甲基化特異性 PCR （MSP） - HLA 基因分型 - 微測序 - 實時 PCR（無需水解探針;使用 SNP PolTaq） - 實時多重 PCR
rec. from E.coli
eclass-Nr: 32-16-05-02
Genaxxon可持續生產和交易。我們的產品盡可能在德國制造。運輸時要注意二氧化碳中和。 Genaxxon 專注于PCR和實時定量PCR（qPCR），能夠將*的新產品和開發推向市場。在2017年，我們引入了凍干的qPCR 預混液，其形式為珠粒（LyoBalls>），預先分裝在試管條或PCR板中或呈粉末狀（LyoMix>）。這些預混合料具有液體預混合料的所有優點，但相比之下，在室溫下穩定，無需冷卻。 這些凍干的預混合物是我們實時熒光定量PCR（qPCR）預混合物的進一步開發。其中包括帶有和不帶有熒光染料的Green和Probe qPCR主混合物。這些產品針對羅氏（LightCycler?480），Qiagen（Rotor-Gene?），LifeTechnologies（StepOnePlus?）和Applied Biosystems（Mx3005P?）等市場PCR裝置進行了專門調整和優化。
上海牧榮生物科技有限公司 是一家專注于分子生物學、細胞生物學、細菌學、遺傳學、免疫學、生物化學、蛋白質學、細胞治療、臨床應用等領域，以銷售為主的生物技術公司。銷售的產品涉及，細胞株和菌株、胎牛血清、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細胞因子、技術服務、實驗耗材和消耗品、儀器設備等。客戶遍布大學、研究所、醫院、衛生防疫、商品檢驗檢疫、制藥公司、生物技術公司和食品工業等單位。Genaxxon銷售
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