外切β1，4葡聚糖酶/纖維二糖水解酶（C1）測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

C1（EC3.2.1.91）存在于細菌、真菌和動物體內，是纖維素酶系的組份之一，C1催化多聚糖鏈的末端非還原端釋放出纖維二糖和葡萄糖。

測定原理：

采用3,5－二硝基水楊酸法測定C1催化微晶纖維素降解產生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品：

酶標儀/可見分光光度計、水浴鍋、離心機、可調式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體6mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體25mL×1瓶，4℃保存；

樣品測定的準備： 

1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至540nm，蒸餾水調零。

2、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，37℃準確水浴2h

混勻， 90℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，測540nm下吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。

C1活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y = 6.4078x - 0.0673；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、血清（漿）C1活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

C1活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷V樣÷T

=14.305×(ΔA+0.0673)

3、細胞、細菌和組織中C1活力的計算

（1）按照蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

C1活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

C1活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

C1活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T

=0.0286×(ΔA+0.0673)

1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反總：反應體系總體積，0.11mL； V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，120 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y = 3.2039x - 0.0673；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、血清（漿）C1活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

C1活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷V樣÷T

=28.61×(ΔA+0.0673)

3、細胞、細菌和組織中C1活力的計算

（1）按照蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

C1活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

C1活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

C1活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T

=0.057×(ΔA+0.0673)

1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反總：反應體系總體積，0.11mL； V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，120 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為客戶全面解決實驗、生產、開發需求。公司整合國際與國內資源，加強網絡建設，提高公司內部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優惠的價格。

外切β1，4葡聚糖酶/纖維二糖水解酶（C1）測試盒