帶正電荷的 Nanogold®可以參與許多不同的標(biāo)記反應(yīng)。

如果您想要綴合的分子具有羧酸基團(tuán)（例如肽中的C端），您可以使用肽合成中使用的反應(yīng)將其與帶正電荷的納米金綴合：使用EDC（ 1-乙基）激活羧酸-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽)和磺基-NHS；您可以從多種來源購買 EDC。 EDC 與待標(biāo)記分子上的羧基反應(yīng)，形成胺反應(yīng)性 O-酰基異脲中間體。該中間體容易水解，使其在水溶液中的壽命較短。添加磺基-NHS (5 mM) 通過將胺反應(yīng)性中間體轉(zhuǎn)化為胺反應(yīng)性磺基 -NHS 酯來穩(wěn)定胺反應(yīng)性中間體，從而提高 EDC 介導(dǎo)的偶聯(lián)反應(yīng)的效率。這種活化的磺基-NHS 酯隨后很容易與氨基反應(yīng)。

或者，帶正電的 Nanogold® 上的氨基可以使用交聯(lián)劑激活。顯示了兩個(gè)示例。首先，使用水溶性同雙功能交聯(lián)劑雙（磺基-琥珀酰亞胺基）辛二酸酯（BS3） 來綴合肽的N端，其中C端已被保護(hù)。該過程的一個(gè)特點(diǎn)是它提供了相對(duì)較長(zhǎng)的鏈接：BS3 的 C8 鏈被添加到帶有胺的丙基上，該胺突出到 Nanogold® 顆粒配體殼的外表面之外。在第二個(gè)方案中，水溶性異雙功能交聯(lián)劑，磺基-琥珀酰亞胺基 4-[ N-馬來酰亞胺基-甲基]-環(huán)己烷-1-羧酸酯 ( Sulfo -SMCC)，用于將胺與馬來酰亞胺基團(tuán)選擇性地與硫醇反應(yīng)。然后使用馬來酰亞胺衍生物來標(biāo)記硫醇化生物分子，例如含有半胱氨酸的肽。多種其他交聯(lián)劑可用于將胺連接至不同的官能團(tuán)；